Der er næsten alle de virksomheder, der solgtebromelain enzympulverer blandet med papain. Det er svært at rense bromelain til 5000GDU/g. men det er meget nemt at rense papain til 1000.000GDU/g. endda til 2000.000 GDU/g. men bromelains funktioner er forskellige fra papain. farven, orden, vandopløseligheden og smagen står i kontrast til det falske produkt og det ægte produkt. De er forskellen det rigtige bromelain enzympulver er gråt, lugtløst, smagløst og vanduopløseligt.
Men den falske bromelain har følgende egenskaber:
● Den er lysegul, aromatisk og mild sød og vandopløselig. Det er kendetegnende for papain.
● Det bruges til at reducere betændelse og lindre smerter. men der er næsten ingen disse funktioner i papain.
● Det bruges kun som kosttilskud, ikke fødevaretilsætningsstof, men kan faktisk være farma-kvalitet. Men papain bruges kun som kødmørningspulver og kosmetik.
Vi testede bromelain i henhold til SDS-PAGE gel- og GELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL og HPLC-metoder, der er færre målmolekyler i SDS-PAGE-gelmetoden for falske produkter.
Følgende er resultaterne for SDS-sidens elektroforese
Plettet i ovenstående viser, at kun det rigtige produkt har den samme pletter på det rigtige sted på billedet, men det falske produkt har små pletter på sig, hvilket betyder, at molekylvægten knap er synlig.
Molekylvægten af Bromelain er omkring 33000, men molekylvægten af papain er 21000. Og HPLC-kromatogrammet:
Du vil se, at kun det rigtige ekstrakt indeholder de rigtige molekylvægte af bromelain og kan påvises ved HPLC.
Men hvis vi kun testede ved Gelatine Digestion Unit Analytical Method (GDU), se bilag II. Både det rigtige og det falske produkt har de samme resultater som nedenfor:
Ananasstængel er meget billig, og hastigheden fra stængel til bromelain er meget lav, der er en vis forurening i fremstillingsprocessen.
Næsten alle bromelain-enzympulverfabrikker er tæt på området. De bruger frisk stilk. Det er umuligt at sende stammen på lang afstand. Råmaterialet skal håndteres så hurtigt som muligt, når det er indsamlet fra marken, eller det skal opbevares i et miljø med lav temperatur (4-8 grad ) for at undgå proteinnedbrydning. I det virkelige liv kan producenten faktisk ikke opfylde nogen af de to ovenstående betingelser på grund af for mange stængler af ananas. Den rimelige metode er en balance mellem håndteringstid og tab af proteinaktivitet. Normalt fremstiller råmaterialerne i ananashøstsæsonen og opbevarer råmaterialerne i et miljø med lav temperatur (4-8 grad ).
Vi laver en test om SDS-side-elektroforese. I teorien kan vi hæve den til 10,000 eller 20,000.men det vil være meget dyrt. 5000GDU/g og gør den stabil måske på en malto-understøtning/mikroindkapslet en eller andet plus ekstraktion/oprensning af organisk kvalitet.
Bilag I
● Metode 5 SDS polyacrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE)
SDS-PAGE er en denatureret polyacrylamidgelelektroforesemetode. Princippet om proteinadskillelse i denne metode er baseret på det faktum, at de fleste proteiner kan kombineres med det anioniske overfladeaktive stof natriumdodecylsulfat (SDS) i et vægtforhold for at danne et kompleks
Den negative ladning båret af proteinmolekyler overstiger langt nettoladningen af naturlige proteinmolekyler, hvilket eliminerer ladningseffekten af forskellige proteinmolekyler og adskiller proteiner i henhold til deres molekylære størrelse.
Denne metode bruges til kvalitativ identifikation, renheds- og urenhedskontrol og kvantitativ bestemmelse af proteiner.
1 Instrumentenhed
Konstant spænding eller konstant strømforsyning, lodret pladeelektroforesebeholder og klæbemiddelfremstillingsform.
2. Reagenser
(1) Vand.
(2) Separationsgelbuffer (4x, opløsning A) 1,5 mol/L trihydroxymethylaminomethan-saltsyrebuffer. Vej 18,15 g trihydroxymethylaminomethan og opløs det med en passende mængde vand. Juster pH-værdien til 88 med saltsyre og fortynd til 100 ml med vand.
(3) Vej 58.0g akrylamid og 20g N,N'-methylenbisacrylamid i 30 procent akrylamidopløsning (B-opløsning), opløs i varmt vand og fortynd til 200 ml, filtrer med filterpapir (opbevares i mørk).
(4) Vej 10 g natriumdodecylsulfat i 10 procent SDS-opløsning (C-opløsning), opløs i vand og fortynd til 100 ml
(5) Kommercialiseringsreagens af tetramethylethylendiaminopløsning (TEMED, D-opløsning).
10 procent ammoniumpersulfatopløsning (E-opløsning) Vej 10 g ammoniumpersulfat, opløs i vand og fortynd til 100 ml. Det anbefales at forberede det før brug eller opbevare det separat ved -20 grader i 2 uger.
(7) Koncentreret gummibuffer (4 ×, F opløsning) 0,5 mol/L Trihydroxymethylaminomethan Saltsyrebuffer, vej 6,05 g Trihydroxymethylaminomethan, tilsæt en passende mængde vand for at opløse, juster pH-værdien til 6,8 med saltsyre syre, og fortynd med vand til 100 ml.
(8) Elektrodebuffer (10 ×) Vej 30 g trimethylaminomethan, 144 g glycin og 10 g natriumdodecylsulfat, opløs dem i vand og fortynd til ca. 800 ml. Juster pH-værdien til 8.1-8.8 med saltsyre, og fortynd til 1000 ml med vand.
(9) Ikke-reduceret prøvebuffer (4 ×) Vej 303 g trimethylaminomethan, 20 mg bromphenolblåt og 8,0 g natriumdodecylsulfat, mål 40 ml glycerol, opløs i vand og fortynd til ca. 80 ml. Juster pH til 68 med saltsyre og fortynd til 100 ml med vand.
(8) Elektrodebuffer (10 ×) Vej 30 g trimethylaminomethan, 144 g glycin og 10 g natriumdodecylsulfat, opløs i vand og fortynd til ca. 800 ml. Juster DH-værdien til 81-88 med saltsyre og fortynd til 1000 ml med vand
(9) Ikke-reduceret prøvebuffer (4 ×) Vej 3,03 g trimethylaminomethan, 20 mg bromphenolblåt og 80 g natriumdodecylsulfat, mål 40 ml glycerol, opløs i vand og fortynd til ca. 80 ml. Juster pH til 6,8 med saltsyre og fortynd til 100 ml med vand.
(10) Reduceret teststofbuffer (4 ×) Vej 3,03 g trimethylaminomethan, 20 mg bromphenolblåt og 80 g natriumdodecylsulfat, mål 40 ml glycerol, opløs og fortynd med vand til ca. 80 ml, og tilsæt - 20ml mercaptoethanol, juster pH til 6,8 med saltsyre, fortynd med vand til 100 ml (eller 3,03 g trimethylaminomethan, 20 mg bromphenolblåt, 8,0 g natriumdodecylsulfat, mål 40 ml glycerol, opløs i vand og fortynd til 80 ml, juster pH til 6,8 med saltsyre, fortynd med vand til 100 ml, og før brug tilsættes dithiothreitol til 100 mmol/L).
● Bilag II
Gelatinefordøjelsesenhed Analytical Method (GDU)
A. Formål: Denne procedure bruges til at bestemme den proteolytiske aktivitet af bromelainenzympulver.
B. Udstyr:
1. pH-måler
2. Vandbad med konstant temperatur ved 45,0 grad ± 0,1 grad
3. Analytisk balance
4. Målekolber
5. Volumetriske pipetter
6. Timer
7. Digital burette (nøjagtighed på 0,1 ml)
8. Stinkskab
9. Automatiske pipettere
C. Sikkerhedsforanstaltninger:
Denne test skal udføres i stinkskabet.
1. Brug standard laboratoriesikkerhedspraksis.
2. Formaldehyd: Forbered og opbevar hele tiden i et stinkskab. Kendt kræftfremkaldende og teratogene.
3. Peroxid: Stærkt oxidationsmiddel
D. Reagenser og reagenspræparater:
1. Destilleret vand: ca. 500 ml: juster til en pH på 4,5 med 0,1 N HCI.
2. Gelatinesubstrat:
en. Opløs 25 gram gelatine (Mikrobiologie. 1.04070) i 375 ml varmt vand, bring det i kog. Afkøl til 45 grader.
b. Juster pH til 4,5 med 0,1 N HCI og fortynd til 500 ml pH 4,5 destilleret vand.
c. Hold gelatinesubstratet ved 45 grader.
3. Bufferløsning:
en. Tilsæt 15 g NaCl langsomt til 40-50 ml vand i et 150 ml bægerglas, og omrør for at opløses.
b. Tilsæt 0.570 ml eddikesyre.
c. Juster pH til 4,5 med 0.2N HCL (volumen vil være større end 100 ml.)
4. 3 procent hydrogenperoxid:
en. Pipetter 2,5 ml 30 procent hydrogenperoxid (stamopløsning) i en 25 ml målekolbe og fortynd til volumen med pH 4,5 destilleret vand
5. 37 procent formaldehyd pH 9.0: a. Juster et tilstrækkeligt volumen (100 ml) formaldehyd til pH 9,0 med 0,1 N NaOH (ca. 20 ml formaldehyd pr. prøve før pH-justering).
Gelatine Digestion Unit Analytical Method (GDU) - forts.
6. 0.100 N NaOH: (Købt standardiseret) a. Stamopløsning: standardiseret til 0,100 N
E. Fremgangsmåde:
1. Enzympræparation:
en. Beregning af enzympræparat
Vægt {{0}}/målaktivitet (ca. 0,05 g eller 50 mg)
A. Vej enzymet nøjagtigt i 50 ml målekolbe
B. Tilsæt 8,3 ml bufferopløsning.
b. Lad stå i 30 minutter ved stuetemperatur.
C. Fortynd til 50 ml med pH 4,5 destilleret vand, tilsæt en lille rørestang og omrør i yderligere 10 til 15 minutter
2. Enzymprocedure:
en. Pipetter 25 ml gelatinesubstrat i hver af to 100 ml bægerglas indeholdende rørestave, og anbring dem i et vandbad ved 45 grader i 5 minutter, den ene til testopløsningen og den anden til den tomme opløsning.
b. Testopløsning:
1) Tilsæt 1,0 ml bromelain-enzympulveropløsning i bægerglasset, der er beregnet til testopløsningen, start timingen og drej rundt.
2) Efter nøjagtig 20 minutters inkubation ved 45 grader tilsættes 0,1 ml 3 procent hydrogenperoxid og hvirvles rundt.
3) Inkuber i yderligere 5 minutter.
4) Fjern bægerglasset fra vandbadet og indsæt pH-sonden under konstant omrøring.
5) Registrer pH efter 10 sekunder (initial pH)
6) Juster til pH 6.0 med 0.1 N NaOH. (Ca. 2-4 ml)
*Bemærk: Når du justerer pH til 6.0 skal du være forsigtig ved pH 5,8; pH stiger langsomt, og små tilsætninger af NaOH på dette tidspunkt vil øge pH betydeligt.
7) Fortsæt konstant omrøring, tilsæt 10 ml 37 procent formaldehyd pH 9,0.
8) Registrer pH efter 10 sekunder og 1 minut.
9) Titrér til pH 9.0 med 0.1 N NaOH.
10) Optag titreringsvolumenet.
Dette er testtiteren, T. c.
Blankopløsning: Blankopløsningen skal køres samtidig med testopløsningen. Dette opnås ved at starte bestemmelsen af blank opløsning 12 minutter efter, at testopløsningen er startet. Det giver dig tid til at fuldføre analysen af testopløsningen, før du skal fortsætte med den tomme opløsning. 1) Tilsæt 0,1 ml 3 procent hydrogenperoxid til bægerglasset, der er beregnet til blindopløsningen, og hvirvl.
2) Efter nøjagtig 20 minutters inkubation ved 45 grader, tilsæt 1,0 ml bromelainopløsning og hvirvl.
3) Inkuber i yderligere 5 minutter.
GELATINE FORDØJELSESENHED ANALYTISK METODE (GDU) - forts.
4) Fjern bægerglasset fra vandbadet og indsæt pH-sonden under konstant omrøring.
5) Registrer pH efter 10 sekunder (initial pH)
6) Juster til pH 6.0 med 0.1 N NaOH. (Ca. 2-4 ml)*Se bemærkning ovenfor.
7) Fortsæt konstant omrøring, tilsæt 10 ml 37 procent formaldehyd pH 9,0.
8) Registrer pH efter 10 sekunder og 1 minut.
9) Titrér til pH 9.0 med 0.1 N NaOH.
10) Optag titreringsvolumenet. Dette er den tomme titer, B.
F. Beregning:
1. Definition: En gelatinefordøjelsesenhed er den mængde enzym, som efter 20 minutters fordøjelse ved 45 grader frigiver 1 mg aminonitrogen fra en standard gelatineopløsning ved pH 4,5 eller pH 5,5 (GDU pH 4,5 eller pH 5,5).
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Vægt (g) Hvor: T=Testtiter (ml 0.1 N NaOH) B=Blanktiter (ml 0,1 N NaOH) N=Normalitet af standardiseret NaOH (dvs. 0,100) Vægt (g)=Startvægt af enzym
G. Testparametre:
1. Enzympræparater fortyndes til en koncentration på ca. 0,001 g/ml (1 mg/ml) eller for bromelain-enzympulverkoncentrat ca. 1-2 GDU/ml. Et referencemateriale analyseres med hver kørsel for at sikre metodenøjagtighed.
Guanjie leverer bromelainpulver i bulk ved hjælp af GDU-testmetoden.Vores produktionsproces fungerer under CGMP-standardværksteder og bruger tre produktionslinjer på tværs af to fabrikker og to uafhængige laboratorier. For eventuelle spørgsmål vedrørende vores produkter, bedes du kontakte os påinfo@gybiotech.com.